2013年自考生物化學(xué)復(fù)習(xí)資料（2）

更新時間：2013-05-03 13:39:05 來源：|0

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　　6、因素影響DNA的復(fù)性過程：(1)陽離子可中和DNA分子中磷酸基團的負電荷，減弱DNA鏈間的靜電作用，促進DNA的復(fù)性;(2)低于Tm的溫度可以促進DNA復(fù)性;(3)DNA鏈濃度增高可以加快互補鏈隨機碰撞的速度和機會，從而促進DNA復(fù)性。

　　7、蛋白質(zhì)中N的平均含量為16%，即lmg蛋白氨相當于6.25mg蛋白質(zhì)。除甘氨酸外，其他蛋白質(zhì)氨基酸均為L-型氨基酸。氨基酸的凈電荷為零，這個PH值成為等電點(氨基酸溶劑度最低)。

　　8. 簡述蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系。

　　概念是不同的。沉淀是指在某些因素的影響下，蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象;而變性是指在變性因素的作用下蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)被破壞，生物活性喪失，理化性質(zhì)發(fā)生改變。變性的蛋白質(zhì)溶解度明顯降低，易結(jié)絮、凝固而沉淀;但是沉淀的蛋白質(zhì)卻不一定變性，如加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀是由于蛋白質(zhì)熱變性所致，而硫酸銨鹽析所得蛋白質(zhì)沉淀一般不會變性。

　　9. 試論蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)與空間結(jié)構(gòu)的關(guān)系。

　?、僖訰NA酶變性與復(fù)性實驗、有活性牛胰島素的人工合成為例證實蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)決定其空間結(jié)構(gòu)。②Anfinsen發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)能加速蛋白質(zhì)正確二硫鍵的形成;如RNA酶復(fù)性的過程是十分緩慢的，有時需要幾個小時，而PDI在體外能幫助變性后的RNA酶在2min內(nèi)復(fù)性。分子伴侶在細胞內(nèi)能夠幫助新生肽鏈正確組裝成為成熟的蛋白質(zhì)。由此可見，蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的形成既決定于其一級結(jié)構(gòu)，也與分子伴侶、蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶等助折疊蛋白的助折疊作用密不可分。

　　10. 概述蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測定的一般程序。

　　蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)測定的一般程序為：①測定蛋白質(zhì)(要求純度必須達到97%以上)的相對分子質(zhì)量和它的氨基酸組成，推測所含氨基酸的大致數(shù)目。②測定多肽鏈N-末端和C-末端的氨基酸，從而確定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目。然后通過對二硫鍵的測定，查明蛋白質(zhì)分子中二硫鍵的有無及數(shù)目。如果蛋白質(zhì)分子中多肽鏈之間含有二硫鍵，則必須拆開二硫鍵，并對不同的多肽鏈進行分離提純。③用裂解點不同的兩種裂解方法(如胰蛋白酶裂解法和溴化氰裂解法)分別將很長的多肽鏈裂解成兩套較短的肽段。④分離提純所產(chǎn)生的肽段，用蛋白質(zhì)序列儀分別測定它們的氨基酸序列。⑤應(yīng)用肽段序列重疊法確定各種肽段在多肽鏈中的排列次序，即確定多肽鏈中氨基酸排列順序。⑥如果有二硫鍵，需要確定其在多肽鏈中的位置。

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